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小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書
【用途】 用于小鵝瘟病毒核酸的檢測。
【試劑】
編號 | 20T | 50T | 保存 | |
裂解液 | 4mL | 10mL | 室溫 | A盒 |
無水乙醇 | 4mL | 10mL | 室溫 | |
去蛋白漂洗液 | 12mL | 28mL | 室溫 | |
洗滌液 | 32mL | 77mL | 室溫 | |
洗脫液 | 2mL | 5mL | 室溫 | |
蛋白酶K | 0.2mL | 0.5mL | -20℃ | B盒 |
PCR反應液 | 200μL | 500μL | -20℃ | |
引物 | 40μL | 100μL | -20℃ | |
陽性對照 | 30μL | 30μL | -20℃ | |
陰性對照 | 300μL | 300μL | -20℃ | |
DL2000 DNA Marker | 20μL | 50μL | -20℃ | |
【小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書操作步驟】
1.樣本前處理及核酸提取
樣本前處理：
取適量病料心、肝、腸等組織，于滅菌研缽充分研磨，用PBS按照1：3體積稀釋成均勻乳劑，經10 000rpm離心3 min。
核酸提?。?/span>
(1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液，劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8℃)混勻5～10秒。
(2)56℃溫浴10分鐘。
(3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇，充分振蕩混勻5～10秒。
(4)將步驟3中混勻的液體轉移至一只套有收集管的純化柱上，10 000rpm離心1分鐘，棄去套管內液體。
(5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上，10 000rpm離心1分鐘，并棄去套管內液體。
(6)將700μL洗滌液加入純化柱上，10 000rpm離心1分鐘，并棄去套管內液體。
(7)可選：重復步驟（6）。
(8)再將純化柱放回接液管上，13 000rpm離心1分鐘。
(9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。
(10)向離心柱內加50μL洗脫液，室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘，棄純化柱，離心管內液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用，請保存于-20℃。
2. PCR加樣體系（總體系20 μL）：將下列試劑加入PCR反應管中。
PCR反應液 引物 | 10μL 2.0μL |
模 板 | 8μL |
（注：陰、陽性對照設立，由試劑盒提供的標準品直接替換“模板"即可。）
3. 反應程序
94℃預變性 | 5min |
94℃變性 | 30s |
51℃退火 | 30s 共34個循環(huán) |
72℃延伸 | 30s |
72℃延伸 6min | |
4℃ | 5min |
4. 電 泳
配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產物5uL，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3μl DL2000 DNA Marker，在120v-130v 電壓下，1×TAE液中電泳15-20min，在紫外成像儀下觀察結果。
【結果判定】
在372b左右位置出現擴增帶，核酸檢測為陽性（如圖）。
在372b左右位置未出現擴增帶，核酸檢測為陰性 。
1.B盒使用之前請*溶解并離心數秒后使用，蛋白酶K開蓋使用后建議保存于2-8℃。
2 反復凍融試劑將降低檢測靈敏度，盡量減少反復凍融。
3 為避免樣本間的交叉污染，模板最后加，加模板時先加陰性對照，再加檢測樣品，最后加陽性對照，有條件的實驗室加模板的移液器應與加其它組份的移液器分開。
4 上機前注意檢查確保反應混合液內無氣泡，且反應管蓋緊。
【生產企業(yè)】
企業(yè)名稱：山東綠都生物科技有限公司
生產地址：山東省濱州市經濟開發(fā)區(qū)黃河二路169號綠都生物工程高科技園
【有效期】本制品有效期為1年，生產日期見包裝內側。
僅供獸醫(yī)診斷使用
長期提供原核、真核蛋白表達構建服務
長期 提供抗原偶聯、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯標記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務
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武經理
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